La cuarta esposa de Felipe II fue su sobrina Ana de Austria, hija mayor de su hermana María, emperatriz de Alemania por su matrimonio con Maximiliano II de Habsburgo-Jagellon .

 Nacida en Cigales (Valladolid) el 1 de noviembre de 1549, casó al cumplir los veintiún años con su tío Felipe II, que había enviudado tres veces y necesitaba un heredero varón para la sucesión, pues el monarca hispano sólo tenía dos hijas de su tercer matrimonio con Isabel de Valois (Isabel Clara Eugenia y Catalina Micaela).

 Las bodas se celabraron en el Alcázar de Segovia el 14 de noviembre de 1570. La reina murió a los 31 años en Badajoz, el 26 de octubre de 1480. En diez años de matrimonio había dado a su esposo 5 hijos, de los cuales sólo sobrevivió uno, el futuro de Felipe III .